Penetapan Inhibitory Activity Peroksidase dari Ekstrak Daun Tomat oleh Gula D-psikosa dan L-psikosa. (Determination of Inhibitory Activity Peroxidase from Tomato Leaves Extract Against D-psicose and L-psicose

Abstract

Penelitian ini dilaksanakan Penelitian dilaksanakan pada bulan Mei 2015 – Desember 2015 di Laboratorium Kimia dan Gizi Pangan Fakultas Peternakan dan Pertanian dan Laboratorium Terpadu, Universitas Diponegoro, Semarang. Penelitian ini bertujuan untuk mengukur aktivitas inhibisi D-psikosa dan L-psikosa pada enzim peroksidase daun tomat dengan penentuan nilai Km, Vmax dan Ki. Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun tomat (diambil sesaat sebelum proses pemanenan), H2O2 (Merck, Germany), 2,2’-azino-bis (3- ethylbenzthia-zoline-6-sulfonicacid)(ABTS)(AppliChem, Germany Lot no. 2X001714), DEAE-Sepharose (Sigma-Aldrich, USA, Lot no.MKBS5227V), Sodium Chloride (HIMEDIA, India), di-Sodium Hydrogen Phosphate (HIMEDIA, India), rare sugar D-psikosa dan L-psikosa (Kagawa Rare Sugar Research Center, Japan) dan bahan reagen lainnya yang sesuai dengan dipersyaratkan. Alat yang digunakan diantaranya timbangan analitik, kolom purifikasi, plate reader (Biochrom EZ Read 800 Plus Microplate Reader, United Kingdom), centrifuse tube, centrifuge, vortex, micropipet, refrigrator dan microtube. Metode penelitian yang dilaksanakan terdiri dari Ekstraksi Daun Tomat, Purifikasi Peroksidase Daun Tomat, Uji Profil Protein Elektroforesis Gel Poliakrilamida-Sodium Dodesil Sulfat (SDS PAGE), Uji Total Protein Bradford, Pengujian Aktivitas Enzim dengan Inhibitor D-psikosa dan L-psikosa, Perhitungan Kinetika Enzim dan Analisis Data. Hasil penelitian nilai Km, Vmax dan Ki pada inhibitor D-psikosa secara berturut-turut adalah 0,0184±0,00006, 9,267±0,942 dan 0,809±0,244 mM. Nilai Km, Vmax dan Ki pada inhibitor L-psikosa secara berturut-turut adalah 0,0177±0,0007, 9,82±1,2871 dan 0,499±0,313 mM. Berdasarkan hasil tersebut dapat disimpulkan bahwa nilai Km D-psikosa lebih tinggi daripada L-psikosa sehingga lebih cepat mencapai Vmax atau kemampuan inhibisi lebih rendah dibandingkan L-psikosa. Nilai Ki D-psikosa lebih tinggi daripada L-psikosa sehingga D-psikosa lebih lemah menghambat aktivitas enzim. D-psikosa dan L-psikosa merupakan inhibitor non-kompetitif. Kata Kunci : Daun Tomat, Peroksidase, Kinetika Inhibisi