Isolasi dan karakterisasi Enzim Selulase cairan rumen sapi untuk hidrolisa serbuk gergajian kayu.

Abstract

Selulase merupakan enzim hidrolase yang dapat menghidrolisa selulosa pada ikatan13-1,4—glikosida menghasilkan glukosa Telah dilakukan isolasi dan karaktetisasi enzim selulase dari eairan rumen sapi un¬tuk hidrolisaserbuk gergajian kayu. Ekstrak kasar basil isolasi diuji aktivitas terlebih dahulu pada substrat tertentu dengan tujuan untuk mengetahui jenis enzim yang berperan. Pemurnian dilakukan dengan fraksinasi (NH4)2SO4bertingkat, yakni Fl (0-10%), F2 (10-20%), F3 (20-40A) , F4 (40-60%), F5 (60-80%) dan F6 (80-100%) dilanjutkan sentrifugasi dan dialisis. Jumlah glukosa yang dihasilkan diuji dengan metode Nel¬sou-Somogyi dan diukur absorbansinya pada : 440 urn serta kadar protein diteutu¬kan dengan metode lowry dan diukur absorbansinya. pada : 640 urn menggunakan spektrofotometer uv-vis. Karakterisasi dilakukan pada fraksi enzim dengan aktivitas tertinggi dengan pada kondisi pH, suhu dan waktu inkubasi tertentu. Kondisi optimum yang diperoleh dipakai untuk hidrolisa selulosa dari serbuk gergajian kayu Hasil penelitian menunjukkan bahwa jenis enzim endo 11-1,4-glukanase deng¬an substrat CMC mempunyai aktivitas spesifik yang paling dorninan 45,6496 U/mg. Aktivitas spesifik tertinggi terdapat pada. fraksi 5 (60-80%), 98,3409 U/mg. Kondisi optimum terjadi pada pH : 5,4; suhu : 40°C dan waktu inkubasi 60 menit. Glukosa yang dihasilkan dari hidrolisa selulosa serbuk gergajian kayu sebesar 18,1193 mg tiap 50 mg sampel. Cellulases is hydrolase enzyme can hydrolize cellulose at p-1.4-glycosidic bonding to produce glucose. Cellulases enzyme has been isolated and also characterized from the beefs liquid rumen to hydroliiing saw dust of wood. The activity of crude exstract then tested first, on certain substrat to know what enzyme playas of role. Purifying is carried out by precipitated (NH4)2SO4 fraction i.e. Fl (0-10%), F2 (10-20%), F3 (20-40%), F4 (40-60%), F4 (60-80%), F5 (60-80%) and F6 (80-100%) then are centrifugated and dialized. Glucose activity then tested with Nelson-Somogyi methode and measured its absorbantion on : 440 nm and the protein procentage by Lowry methode and its absorbantion : 640 nm using spectrofoto-meter uv-vis. Characterization offraction enzyme with the highest activity is under conditi¬on pH, temperature and time incubation. The option conditional if characterization result is need for hydrolizing cellulose from saw dust of wood. The experimental result show that type endo13-1.4 glucanase enzyme on crude extract with CMC's substrat is have dominant spesific activity, 45.6496 U/mg. Optimum condition happened with the pH ; 5.4 ; temperature 40°C and time incubation 60 minutes. The highest Specific'Activity in fraction 5 (60 — 80%), 98,3409 U/mg. The Product glucose from hydrolizing saw dust in amount of 18.1193 mg /50 mg sample.