Isolasi dan Kloning Fragmen Gen P5CS dari Tanaman Tebu (Saccharum officinarum L.) Varietas PSJT 941.

Abstract

Cekaman lingkungan seperti kekeringan merupakan salah satu faktor yang mempengaruhi pertumbuhan tanaman. Tanaman mengakumulasi senyawa osmoprotektan untuk mengatasi cekaman lingkungan tersebut. Prolin merupakan senyawa osmoprotektan yang dapat melindungi tanaman dari kekeringan. Prolin disintesis oleh enzim 1-Pyrroline-5-carboxylate synthetase yang disandi oleh gen P5CS. Tujuan penelitian ini yaitu untuk mendapatkan fragmen gen P5CS dari S. officinarum varietas PSJT 941 melalui tahapan isolasi dan kloning. Amplifikasi fragmen gen P5CS dilakukan dengan teknik Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) menggunakan primer gen P5CS dan selanjutnya dikloning menggunakan vektor plasmid pGEM-T Easy yang ditransformasikan ke dalam Escherichia coli XL 1 Blue. Hasil penelitian diperoleh fragmen gen sepanjang 984 bp, 975 bp, dan 1725 bp. Fragmen gen tersebut juga berhasil dikloning ke dalam E. coli XL 1 Blue. Produk RT-PCR dari S. officinarum disekuensing dan dianalisis homologinya dengan beberapa sekuen gen P5CS di pusat data Genbank. Analisis BLAST menunjukkan bahwa sekuen fragmen gen produk RT-PCR yang berasal dari S. officinarum PSJT 941 memiliki homologi yang sangat tinggi (99%) dengan gen P5CS yang ada dalam pusat data Genbank.