POLIMORFISME ALEL TNF'-@, PADA PENDERITA DHF DI SEMARANG

Abstract

PENDAHULUAN Gen TNF a merupakan bagian dari biologi molekuler sistim kekebalan tubuti rnanusia. Polimorfisme gen TNF- a merupakan hal yang bertanggung jawab terhadap produksi TNF- a yang beriebihan dan akhirnya mengacaukan pengaturan kerja sitokin-sitokin yang akan rnenyebabkan terjadinya penyakit. Beberapa faktor risiko timbulnya penyakit dan kerentanan terhadap penyakit tertentu juga sudah banyak dilaporkan misalnya polimorfisme gen TNF a pada beberapa penyakit infeksi atau sepsis. Pada infeksi virus Dengue, bisa bermanifestasi berupa Demam Dengue atau berupa Dentani berdarah Dengue, mungkin karena ada faktor-faktor genetika yang berperan penting dalam morbiditas dan mortalitas host terhadap penyakit int. Dengan melihat kenyataan di alas peneliti ingin mengetahui apakah ada faktor genetik berpengaruh terhadap terjadinya penyakit demam berdarah dan apakah ada perbedaan polimorfisme aid TNF- a pada penderita DHF dan orang normal di Semarang ? TUJUAN PENELITIAN Tujuan Umum : Melakukan pemeriksaan genetika pada penderita DHF di Semarang Tujuan KhususMETODE PENELITIAN Penelitian ini bersifat deskriptif, dengan melihat adanya polimorfisme alel TNFa pada penderita DliF dan orang normal di Semarang. Jumlah sampel : 50 orang penderita DHF dan 45 orang normal. Dilakukan Ekstraksi DNA dengan metode saturasi gararn (salting out) metode Miller et al.7. Kernudian DNA yang didapat diamplifikasikan di mesin PCR ( Aplied Biosystem ) untuk mendapatkan sekuen gen TNF-a. Polimorfisme TNF-n -308 (G/A) di promoter gen TNF-et ditentukan dengan amplifikasi PCR dengan primer-primer -308F (5' AGG CAA TAG OTT TTG AGG GCC AT 3) dan -308R (5' TCC TCC CTG C fc CGA TTC CG 3'). RFLP dilakukan dengan inkubasi pada 55° C selama 24 jam ( overnight ) , menggunakan enzim Produk PCR divisualisasikan pada gel poliakrilamid 10% dengan pewarnaan silver. Produk PCR dari individu homozigot alel -308A (-308 MA) adalah 107- bp , sedangkan dari individu homozigot alel -3080 (-308 G/G) dicerna sempurna menjadi fragmen-fragrnen 87 bp dan 20 bp. Analisa Statistik : Uji beda chi-square test dengan batas keinaknaan 0,050 yang dilakukan dengan SPSS 10 for Windows. HASIL Pada kelompok kontrol didapatkan ( N= 45 ) A/A — 8 ( 16 % ), G/G= 4 ( 8 % ) dan A/G = 33 ( 66 % ). Pada kelompok DHF didapatkan ( N= 50 ) : A/A = 0, G/G= 21 (42 % ), dan A/G = 29( 58 % ). PEMBAHASAN Prinsip Equilibrium Hardy- Weinberg sesuai pada gambaran alel gen TNF-a pada kelompok kontrol, tetapi sebaliknya pada kelompok DHF prinsip ini tidak sesuai karena tidak diternukan alel A/A. I lal ini niungkin disebabkan sampel penelifian yang kurang banyak. Pada penelitian ini alel gen TNF-a yang didapatkan pada kelornpok kontrol ( bukan penderita DHF ) adalah homozigot A/A dan heterozigot MG dimana alel gen TNadalah " high producer TNF-a" , sedangkan pada kelompok penderita DHF didapatkan alel gen TNF-u G/G dan heterozigot A/G. Hal Mi tidak sesuai dengan teori yang mengatakan bahwa ald gen TNF-a A/A akan lebih banyak memproduksi TNF-a yang berperan pada proses inflamasi , yang akan rnenyebabkan peningkatan permeabilitas kapiler sehingga jika berlebihan akan menyebabkan perdarahan dan syok. Pada inveksi virus Dengue, jika tidak terjadi peningkatan permeabilitas kapiler yang berlebih hanya akan mengakibatkan demam dengue, sedangkan jika peningkatan permeabilitas kapilcr yang berlebih akan menyebabkan Dengue Themorrhagic Fever. KESIMPULAN Pada penelitian ini didapatkan : 1. Alel gen TNIF-a hornozigot G/G (42%) dan heterozigot NG (58%) path kelompok penderita DI-1F 2. Mel gen TNF-ct homozigot A/A( 16 %) dan heterozigot A/G (66 %) dan homozigot G/G ( 8 % ) pada kelompok kontrol. 3. Mel gen TNF-a "high producer" justru didapatkan pada kelompok yang bukan DHF.